SIST ISO 10229:1997

SLOVENSKI STANDARD
SIST ISO 10229:1997
01-januar-1997
Kakovost vode - Ugotavljanje strupenosti snovi s sladkovodnimi ribami v
podaljšanem testu - Metoda za vrednotenje vplivov snovi na hitrost rasti šarenke
(Oncorhynchus mykiss Walbaum (Teleostei, Salmonidae)
Water quality -- Determination of the prolonged toxicity of substances to freshwater fish --
Method for evaluating the effects of substances on the growth rate of rainbow trout
(Oncorhynchus mykiss Walbaum (Teleostei, Salmonidae))
Qualité de l'eau -- Détermination de la toxicité à long terme de substances vis-à-vis d'un
poisson d'eau douce -- Méthode d'évaluation des effets de substances sur le taux de
croissance de la truite arc-en-ciel (Oncorhynchus mykiss Walbaum (Teleostei,
Salmonidae))
Ta slovenski standard je istoveten z: ISO 10229:1994
ICS:
13.060.70 Preiskava bioloških lastnosti Examination of biological
vode properties of water
SIST ISO 10229:1997 en
2003-01.Slovenski inštitut za standardizacijo. Razmnoževanje celote ali delov tega standarda ni dovoljeno.

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SIST ISO 10229:1997

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SIST ISO 10229:1997
INTERNATIONAL
ISO
STANDARD
10229
First edition
1994-12-01
Water quality - Determination of the
prolonged toxicity of substances to
freshwater fish
- Method for evaluating
the effects of substances on the growth
rate of rainbow trout [Oncorhynchus mykiss
Walbaum (Teleostei, Salmonidae)]
Qualitk de I’eau - Determination de Ia toxicite prolongke de substances
vis-a-vis d’un poisson d’eau douce - Methode d’evaluation des effets de
substances sur Ie taux de croissance de Ia truite arc-en-Cie/ [Oncorhynchus
mykiss Walbaum (Teleostei, Salmonidae)]
Reference number /
,
ISO 10229:1994(E)

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SIST ISO 10229:1997
ISO 10229:1994(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide
federation of national Standards bodies (ISO member bodies). The work
of preparing International Standards is normally carried out through ISO
technical committees. Esch member body interested in a subject for
which a technical committee has been established has the right to be
represented on that committee. International organizations, governmental
and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO
collaborates closely with the International Electrotechnical Commission
(IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
Draft International Standards adopted by the technical committees are
circulated to the member bodies for voting. Publication as an International
Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting
a vote.
International Standard ISO 10229 was prepared by Technical Committee
lSO/TC 147, Water quality, Subcommittee SC 5, Biological methods.
Annexes A and B of this International Standard are for information only.
0 ISO 1994
All rights reserved. Unless otherwise specified, no part of this publication may be reproduced
or utilized in any form or by any means, electronie or mechanical, rncluding photocopying and
microfilm, without Permission In writing from the publisher.
International Organization for Standardization
Case Postale 56 l CH-1 211 Geneve 20 l Switzerland
Printed in Switzerland

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SIST ISO 10229:1997
0 ISO
ISO 10229:1994(E)
Introduction
This International Standard describes methods of determining the long-
term toxicity of substances to freshwater fish. The methods include the
determination of lethal and sublethal responses. In all cases, the specified
use of one species does not preclude the use of other species. lt is
possible for the methods presented here to be used for other species of
freshwater fish, provided that appropriate modifications to, for example,
quality of water used for dilution, temperature conditions and feeding rates
are made and the relationships between growth rates, feeding rates and
conversion efficiencies are established.
Within this International Standard, a choice may be made between semi-
static and flow-through methods. These have already been described for
the determination of the acute lethal toxicity of substances to a freshwater
fish in ISO 7346-2 and ISO 7346-3 respectively. The choice of the method
of presentation of the test Solution depends on two factors: the nature of
the test substance and the form of the test method.
The flow-through method tan be used for most types of substances, in-
cluding those unstable in water, but the concentrations of the test sub-
stance are determined wherever possible. The semi-static method tan be
used for testing those substances whose concentrations tan be main-
tained satisfactorily throughout the test by renewal of the solutions every
24 h.
To assist in the preparation and maintenance of concentrations of sub-
stances which may invoke the Chosen responses in the fish at concen-
trations close to that of their aqueous solubility, a small volume of solvent
is sometimes used, as specified in the methods.
I.0
Ill

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SIST ISO 10229:1997
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SIST ISO 10229:1997
ISO 10229:1994(E)
INTERNATIONAL STANDARD 0 ISO
- Determination of the prolonged
Water quality
- Method for
toxicity of substances to freshwater fish
evaluating the effects of substances on the growth
rate of rainbow trout [Oncorhynchus mykiss Walbaum
(Teleostei, Salmonidae)]
ture, the quantity and quality of the dilution water, the
1 Scope
food and the fish-marking technique.
This International Standard specifies a method for the
determination of the long-term sublethal toxicity of
2 Normative references
substances soluble in water under specified con-
anadromous fish
ditions to a species of
The following Standards contain provisions which,
[ Oncorhynchus mykiss Walbaum (Teleostei, Salmo-
through reference in this text, constitute provisions
nidae) - common name, rainbow trout] in fresh
of this International Standard. At the time of publi-
water.
cation, the editions indicated were valid. All Standards
are subject to revision, and Parties to agreements
NOTE 1 “Substances” is considered to include pure
based an this International Standard are encouraged
chemicals tested singly or in mixtures, waste waters, pro-
to investigate the possibility of applying the most re-
cess waters or other waters whose sublethal toxicity to fish
cent editions of the Standards indicated below.
it is necessary to determine. A range of concentrations of
waste and process waters should be tested (see 8.2). Members of IEC and ISO maintain registers of cur-
rently valid International Standards.
The response measured is the Change in rate of
ISO 7346-2: 1984, Water quality - Determination of
growth of fish exposed to the test substance over
the acute lethal toxicity of substances to a freshwater
periods of 14 d and 28 d (see [I] in annex B).
fish (Brachydanio rerio Hamilton-Buchanan (Teleostei,
NOTE 2 The mass of each fish at the Start of the test, the Cyprinidae)) - Part 2: Semi-sta tic method.
period of exposure, the feeding regime and temperature
range have been Chosen to ensure that the control fish will
ISO 7346-3: 1984, Water quality - Determination of
be growing exponentially throughout the test.
the acute lethal toxicity of substances to a freshwater
fish (Brachydanio rerio Harnikon-Buchanan (Teleostei,
The method is applicable for assigning, for each test
Cyprinidae)) - Part 3: Flow-through method.
substance, a category of prolonged sublethal toxicity
to Oncorhynchus mykiss under the test conditions.
3 Principle
The results are insufficient by themselves to define
water quality limits for environmental protection. Determination, under specified conditions, of the
concentrations at which a substance statistically and
significantly reduces the rate sf growth of a test
lt is possible for the method to be adapted for use
population of Oncorhynchus mykiss after exposure
with other freshwater fish and marine and brackish
periods of 14 d and 28 d to that substance in the
water fish with appropriate modification of the test
ambient water.
conditions, particularly with respect to the tempera-
1

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SIST ISO 10229:1997
Q ISO
ISO 10229:1994(E)
The test is carried out in two stages:
4 Test organism
a preliminary test, carried out using rainbow trout
a)
The recommended test species is Oncorhynchus
as the test species but in accordance with
mykiss Walbaum (Teleostei, Salmonidae), commonly
ISO 7346-2 or ISO 7346-3 (although the rainbow
known as the rainbow trout. Test fish shall be selec-
trout is not specifically named in these Parts of
ted from a population of a Single stock. This stock
ISO 7346), which determines the concentrations
shall have been acclimatized and, in any case, main-
at which the substance is lethal to 50 % of a test
tained for at least 2 weeks Prior to the test in dilution
population after exposure to the substance in the
water, continuously aerated (using bubbled air), under
ambient water for 96 h: this median lethal con-
conditions of water quality, feeding regime and
centration is designated as 96 h LC50 and serves
illumination similar to those used in the test.
to determine the range of concentrations for the
Except where otherwise stated (see clause 8), the
final test (see note 11 to 8.1).
fish shall be fed at a minimum rate of 1 % of their
b) a final test, using 16 fish per concentration, in wet body mass per day during any pre-acclimation and
which the results are recorded as both the lowest acclimation period and 4 % of their mass per day
observed effect concentration (LOEC) and the no during the final test (see 8.2).
observed effect concentration (NOEC). They are
NOTE 4 This latitude in feeding rate during the pretest
prefixed by an indication of the exposure period
period enables the fish to be grown to, or held at, a suitable
concerned, for example “28 d LOEC”. The data
size (see below) for the Start of the test-
may also be fitted to a regression model in Order
to calculate the ICI0 (inhibition concentration for
The food shall be a dry proprietary salmonid ft-y food
a 10 % effect), or a similar statistic.
and shall be divided into two equal portions and given
to the fish in two feeds per day separated by at least
Where analytical data show that median test concen-
5 h. After exposure of 14 d to the test substance,
trations remain relatively constant (i.e. within 20 % of
when the fish are weighed again, the rations shall be
the nominal values) throughout the test, the method
recalculated for each test vessel.
allows the use of either measured or nominal con-
centrations in the Statements on LOEC and NOEC.
At the statt of the test, each fish shall have a mass
Where such analyses show that the concentrations
of not less than 3 g and not more than 5 g (but see
present remain relatively constant (i.e. + 20 % of the
-
8.2). For the whole batch of fish used in the test, the
median) but are less than 80 % or greater than
range in individual masses at the statt of the test shall
120 % of the nominal values, then the analytical val-
lie within + IO % of the arithmetic mean of the
-
ues derived from this method are used in presenting
masses.
the LOEC and NOEC. Where no evidente is available
to show that the test concentrations remained at an
Test fish shall be free of overt disease or visible
acceptable level throughout the test period or where
malformation. They shall not receive treatment for
it is known that the concentrations of the test chemi-
disease during the test or in the 2 weeks preceding
cal have changed significantly (i.e. by greater than the test.
20 % of the median) at any Stage during the test, then
Maintain the fish in environmental conditions suitable
irrespective of whether or not Chemical analytical data
for rainbow trout.
are available the LOEC and NOEC cannot be defined
using this test method. In these cases, the test is not
NOTE 5 Fish cultivation manuals should be consulted, for
necessarily invalidated but it tan only be stated that
example [Z] in annex B.
the LOEC of the substance is < x mg/l, and that the
NOEC of the substance is < y mg/l, the values x and
y given being estimated from the nominal concen-
5 Reagents
trations used.
Use only reagents of recognized analytical grade. The
NOTE 3 Wherever possible, it is very important to deter-
water used for the preparation of stock solutions shall
mine the concentrations of the test substance to which the
be glass-distilled or deionized water of at least equiv-
fish are exposed.
alent purity.
Fish tan be individually recognized throughout the
5.1 Diktion water
test if the freeze-branding technique or an equivalent
method (e.g. tagging) is used for marking, but this is
The dilution water shall be suitable for the long-term
not mandatory.
survival and growth of the test fish. The average pl-i

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SIST ISO 10229:1997
0 ISO
ISO 10229: 1994(E)
is prepared in distilled or deionized water, no more
of the dilution water shall be within the range 6,7 to
than 100 ml of stock Solution should be added per
8,5, but during a given test the pH of the dilution
10 litres of dilution water. Wherever possible, it is
water shall not vary by more than & 0,2 pH units from
very important to determine the concentrations of the
the mean value.
test substance in each test vessel, with the exception
NOTE 6 Such a pH range tan be expected to be associ-
of waste waters where this may not be possible.
ated with a bicarbonate alkalinity of 1 mg/1 to 100 mg/1
CaCO, and total hardness values of 20 mg/1 to 300 mg/1
CaCO,, but these ranges will depend on the precise consti-
6 Apparatus
tution of the dilution water and the time available for
equilibration of the water. A suitable artificial water tan be
6.1 General
made with distilled water, as follows:
All materials which may come into contact with any
294,0 mg/1 CaCl,2H,O
liquid into which the fish are to be placed, or with
which they may come into contact, shall be inert and
123,3 mg/1 MgS0,.7H20
shall not absorb the test substance significantly.
63,0 mg/1 NaHCO,
Usual laboratory equipment [including a dip-net, made
5,5 mg/1 KCI of nylon or of another chemically inert material, for the
control vessels and another for all the test vessels
(6.2)] shall be used.
Stock solutions of test substances
5.2
6.2 Test vessels, of capacity at least 45 litres. Their
sides shall be covered with an opaque material to
Prepare a stock Solution of the test substance by dis-
minimize disturbance of the fish.
solving a known amount of test substance in a de-
fined volume of dilution water, deionized water or
Before use, carefully wash new test vessels and then
glass-distilled water.
rinse successively with water and the dilution water
(5.1). At the end of the test, empty the vessels, clean
NOTE 7 In the case where the test “substance” is a
them, for example with a non-ionic detergent (fol-
waste water, process water or other water (see clause 1,
lowed by acid and solvent washes for substances
note 1) and not one or more pure chemicals, these waters
expected to adsorb strongly to the vessel), rinse with
are to be taken as the stock Solution.
water to remove all traces of the test substance and
cleaning aid, and dry.
Prepare or obtain the stock Solution as frequently as
necessary to maintain stable solutions. Although the
Rinse test vessels with dilution water (5.1) just before
use of solvents is not desirable, to enable stock sol-
use.
utions to be prepared and to assist in their transfer to
the test vessels, it shall be permissible to dissolve or
6.3 Temperature control, to maintain the tempera-
disperse substances of low aqueous solubility by
ture of the test solutions and the water in the fish
suitable means, for example ultrasonic devices or the
stock tanks in the range l2,5 “C to 17,5 “C and to
use of organic solvents of low toxicity to fish. If any
regulate it within + 1 “C.
-
such organic solvent is used, its concentration in the
test Solution shall not exceed 0,l ml/l (and preferably
be below 0,Ol ml/l), and two sets of controls, one
6.4 Solution-replacement equipment, comprising
containina solvent at the maximum concentration
a dosing and mixing apparatus capable of maintaining
used in any test vessel and one without solvent o r
the required concentrations of the stock Solution in
test substance, shall be included.
the test vessels to within 10 % of the mean. The ap-
paratus shall be set to renew the test solutions in the
f
NOTE 8 lt is preferable that the same concentration 0
vessels at a rate which is sufficient to prevent the
used in all test vessels.
...

NORME
INTERNATIONALE
Première édition
1994-I Z-01
Qualité de l’eau - Détermination de la
toxicité à long terme de substances
vis-à-vis d’un poisson d’eau douce -
Méthode d’évaluation des effets de
substances sur le taux de croissance de la
truite arc-en-ciel [ Oncorhynchus mykiss
Walbaum (Teleostei, Salmonidae)]
Wa ter quality - Determination of the prolonged toxicity of substances to
freshwater fish - Method for evaluating the effects of substances on the
growth rate of rainbow trout [Oncorhynchus mykiss Walbaum (Teleostei,
Salmonidaerj
Numéro de référence
ISO 10229: 1994(F)

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ISO 10229:1994(F)
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération
mondiale d’organismes nationaux de normalisation (comités membres de
I’ISO). L’élaboration des Normes internationales est en général confiée aux
comités techniques de I’ISO. Chaque comité membre intéressé par une
étude a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les
organisations internationales, gouvernementales et non gouvernemen-
tales, en liaison avec I’ISO participent également aux travaux. L’ISO colla-
bore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (CEI)
en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques
sont soumis aux comités membres pour vote. Leur publication comme
Normes internationales requiert l’approbation de 75 % au moins des co-
mités membres votants.
La Norme internationale ISO 10229 a été élaborée par le comité technique
ISO/K 147, Qualité de /‘eau, sous-comité SC 5, Méthodes biologiques.
Les annexes A et B de la présente Norme internationale sont données
uniquement à titre d’information.
0 ISO 1994
Droits de reproduction réservés. Sauf prescription différente, aucune partie de cette publi-
cation ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun pro-
cédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans l’accord
écrit de l’éditeur.
Organisation internationale de normalisation
56 l CH-121
Case Postale 1 Genève 20 l Su isse
Version française tirée en 1995
Imprimé en Suisse

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0 ISO
ISO 10229:1994(F)
Introduction
La présente Norme internationale décrit des procédures d’essai pour dé-
terminer la toxicité à long terme de substances vis-à-vis d’un poisson
d’eau douce. Ces méthodes comprennent la détermination des réponses
létales et sublétales. Dans tous les cas, l’utilisation spécifiée d’une espèce
n’exclut pas l’utilisation d’autres espèces. Les méthodes présentées ici
peuvent être aussi utilisées pour d’autres espèces de poissons d’eau
douce, à condition d’apporter des modifications appropriées, par exemple
à la qualité de l’eau de dilution, aux conditions de température et aux taux
d’alimentation et de définir les relations entre les taux de croissance, les
taux d’alimentation et les efficacités de conversion.
Dans le cadre de la présente Norme internationale, un choix peut être
opéré entre les méthodes statique, semi-statique et avec renouvellement
continu. Ces méthodes ont déjà été décrites pour la détermination de la
toxicité aiguë létale de substances vis-à-vis d’un poisson d’eau douce dans
I’ISO 7346-2 et I’ISO 7346-3, respectivement. Le choix de la méthode de
présentation de la solution d’essai dépend de deux facteurs: la nature de
la substance d’essai et la forme de la méthode d’essai.
La méthode avec renouvellement continu peut être utilisée pour la plupart
des types de substances, y compris celles qui sont instables dans l’eau,
mais les concentrations de la substance à expérimenter sont déterminées
chaque fois que possible. La méthode semi-statique peut être utilisée pour
étudier les substances dont la concentration peut être maintenue de façon
satisfaisante tout au long de l’essai par le renouvellement des solutions
toutes les 24 h.
Pour faciliter la préparation et le maintien de concentrations de substances
qui peuvent invoquer les réponses choisies chez le poisson à des
concentrations proches de celle de leur solubilité aqueuse, un faible vo-
lume de solvant est parfois utilisé, comme indiqué dans les méthodes.

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ISO 10229:1994(F)
NORME INTERNATIONALE 0 KO
Qualité de l’eau - Détermination de la toxicité à long
terme de substances vis-à-vis d’un poisson d’eau
Méthode d’évaluation des effets de
douce -
substances sur le taux de croissance de la truite
arc-en-ciel [ Oncorhynchus mykiss Walbaum (Teleostei,
Salmonidae)]
Les résultats sont insuffisants par eux-mêmes pour
1 Domaine d’application
définir les limites de qualité de l’eau pour la protection
de l’environnement.
La présente Norme internationale prescrit une mé-
thode pour la détermination de la toxicité sublétale à
La méthode peut être adaptée à d’autres poissons
long terme de substances solubles dans l’eau dans
d’eau douce, marine et saumâtre avec une modifica-
des conditions spécifiées vis-à-vis d’une espèce de
tion appropriée des conditions d’essai, notamment en
poisson anadrome [Oncorhynchus mykiss Walbaum
ce qui concerne la température, la quantité et la qua-
, Salmonidae) - nom commun, truite
(Teleostei
lité de l’eau de dilution, la nourriture et la technique
arc-en-ciel] dans l’eau douce.
de marquage des poissons.
NOTE 1 (Sub,stances) est considéré comme incluant les
produits chimiques purs testés seuls ou en mélange, les
eaux résiduaires, les eaux industrielles ou d’autres eaux
2 Références normatives
dont il est nécessaire de déterminer la toxicité sublétale
vis-à-vis du poisson. II convient d’examiner les eaux
Les normes suivantes contiennent des dispositions
résiduaires et les eaux industrielles dans une gamme de
qui, par suite de la référence qui en est faite, consti-
dilutions (voir 8.2).
tuent des dispositions valables pour la présente
Norme internationale. Au moment de la publication,
La réponse mesurée est la modification du taux de
les éditions indiquées étaient en vigueur. Toute
croissance du poisson exposé à la substance d’essai
norme est sujette à révision et les parties prenantes
pendant des périodes de 14 jours et 28 jours (voir
des accords fondés sur la présente Norme internatio-
[l] en annexe B).
nale sont invitées à rechercher la possibilité d’appli-
quer les éditions les plus récentes des normes
NOTE 2 La masse de chaque poisson au départ de I’es-
indiquées ci-après. Les membres de la CEI et de I’ISO
sai, la période d’exposition, le programme d’alimentation et
le domaine de température ont été sélectionnés de manière possèdent le registre des Normes internationales en
.
à garantir que le poisson témoin croîtra de manière
vigueur à un moment donné.
exponentielle tout au long de l’essai.
ISO 7346-2:1984, Qualité de l’eau - Détermination
La méthode est applicable pour l’évaluation, pour de la toxicité aiguë létale de substances vis-à-vis
chaque substance d’essai, d’une catégorie de toxicité d’un poisson d’eau douce (Brachydanio rerio
sublétale à long terme vis-à-vis d’Oncorhynchus Hamilton-Buchanan (Teleostei
Cyprinidae)) -
mykiss dans les conditions d’essai. Partie 2: Méthode semi-s ta tique:

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0 ISO
ISO 10229:1994(F)
la durée de l’essai, ou si l’on sait que les concen-
ISO 7346-3:1984, Qualité de l’eau - Détermination
trations de la substance d’essai ont connu une mo-
de la toxicité aiguë létale de substances vis-à-vis
dification significative (c’est-à-dire supérieure à 20 %
d’un poisson d’eau douce (Brachydanio rerio
(Teleos tei Cyprinidae)) - de la moyenne) à un stade quelconque pendant I’es-
Hamilton-Buchanan
sai, dans ce cas, et sans tenir compte de données
Partie 3: Méthode avec renouvellement continu.
analytiques chimiques disponibles ou non, la LOEC
et la NOEC ne peuvent être déterminées en utilisant
la présente méthode d’essai. Dans ces cas, l’essai
3 Principe
n’est pas nécessairement invalidé, mais on peut seu-
lement affirmer que la LOEC de la substance est
Détermination, dans des conditions définies, des
< x mg/1 et que la NOEC de la substance est
concentrations auxquelles une substance réduit, de
< y mg/l, les valeurs x et y données étant estimées à
manière statistiquement significative, le taux de
partir des concentrations nominales utilisées.
croissance d’une population d’essai d’ Oncorhynchus
NOTE 3 Chaque fois que cela est possible, il est très
mykiss après des périodes d’exposition de 14 jours
important de déterminer les concentrations de la substance
et 28 jours à cette substance dans l’eau ambiante.
d’essai à laquelle les poissons sont exposés.
L’essai est réalisé en deux étapes:
Les poissons peuvent être identifiés individuellement
a) un essai préliminaire, réalisé en utilisant la truite tout au long de l’essai en utilisant la technique du
arc-en-ciel comme espèce d’essai, mais en accord marquage à froid ou une méthode équivalente (par
avec I’ISO 7346-2 ou I’ISO 7346-3 (bien que la exemple, le marquage aux radio-éléments), mais ceci
n’est pas obligatoire.
truite arc-en-ciel ne soit pas spécifiquement nom-
mée dans ces parties de I’ISO 7346) qui déter-
mine les concentrations auxquelles la substance
est létale pour 50 % d’une population d’essai
4 Organisme pour essai
après exposition à la substance dans l’eau am-
biante pendant 96 h: cette concentration létale
L’espèce recommandée pour l’essai est Onco-
moyenne est désignée par CL50 96 h et sert à
rhynchus mykiss Walbaum (Teleostei, Salmonidae),
déterminer la gamme des concentrations pour
dont le nom commun est la truite arc-en-ciel. Les
l’essai définitif (voir note 11 en 8.1).
poissons pour essai doivent être sélectionnés à partir
d’une population d’un stock unique. Ce stock doit
utilisant 16 poissons par
b) un essai définitif,
avoir été acclimaté et, dans tous les cas, maintenu
concentration, dans lequel les résultats sont en-
pendant 2 semaines au moins avant l’essai, dans l’eau
registrés à la fois comme la concentration obser-
de dilution, aérée de manière continue par barbotage
vée la plus faible présentant un effet (LOEC) et la
d’air dans des conditions de qualité de l’eau, de pro-
concentration sans effets observés (NOEC). Elles
gramme d’alimentation et d’éclairement semblables
comportent une indication de la période d’expo-
à celles utilisées pour l’essai.
sition concernée, comme dans (( LOEC-28 jours).
Les données peuvent être ajustées à un modèle
Sauf indication contraire (voir article 8) les poissons
de régression, afin de calculer la CII 0 (concen-
doivent être nourris selon une quantité minimale
tration d’inhibition pour un effet à 10 %) ou des
égale à 1 % de leur masse corporelle humide par jour
statistiques similaires.
pendant la période de préacclimatation et d’acclima-
tation et à 4 % par jour pendant l’essai définitif (voir
Si les données analytiques indiquent que les concen-
. .
8 2
trations d’essai moyennes restent relativement
constantes (c’est-à-dire à moins de 20 % des valeurs
NOTE 4 Cette latitude en ce qui concerne la quantité ad-
nominales) tout au long de l’essai, la méthode permet
ministrée pendant la période de pré-essai permet au pois-
alors l’utilisation de concentrations, soit mesurées,
son d’arriver, ou d’être maintenu, à une taille appropriée
soit nominales dans les déclarations sur LOEC et
(voir ci-après) pour le début de l’essai.
NOEC. Si ces analyses indiquent que les concen-
La nourriture doit être constituée par un frai de
trations présentes restent relativement constantes
(c’est-à-dire & 20 % de la moyenne) mais sont infé- salmonidae sec et divisée en deux portions égales
rieures à 80 % ou supérieures à 120 % des valeurs administrées aux poissons à raison de deux rations
nominales, les valeurs analytiques tirées de cette journalières, à 5 h minimum d’intervalle. Après
méthode sont utilisées en présentant la LOEC et la 14 jours d’exposition à la substance d’essai, lorsque
NOEC. S’il n’est pas manifeste que les concentrations les poissons seront repesés, les rations seront calcu-
d’essai restent à un niveau acceptable pendant toute lées à nouveau pour chaque récipient pour essai.

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0 ISO ISO 10229:1994(F)
Au début de l’essai, chaque poisson devra avoir une lution, d’eau déionisée ou d’eau distillée dans un ap-
masse supérieure à 3 g et inférieure à 5 g (mais voir pareil en verre.
également 8.2). Pour l’ensemble du lot de poissons
NOTE 7 Dans le cas où la substance à expérimenter est
utilisés lors de l’essai, la gamme des masses indivi-
une eau usée, une eau industrielle ou une autre eau (voir
duelles au début de l’essai se situera à + 10 % de la
article 1, note 1) et n’est pas constituée par un ou plusieurs
masse arithmétique moyenne.
produits chimiques purs, ces eaux peuvent être considérées
comme la solution mère.
Les poissons d’essai doivent être exempts de mala-
dies ou de malformations visibles. Ils ne doivent subir
Préparer ou obtenir la solution mère aussi fréquem-
aucun traitement pendant l’essai ou pendant les
ment que nécessaire de façon à conserver des solu-
2 semaines qui précèdent l’essai.
tions stables. Bien que l’utilisation de solvants ne soit
pas souhaitable, afin de permettre la préparation des
dans des conditions d’envi-
Maintenir les poissons
solutions mères et de faciliter leur transfert dans les
ronnement appropriées à la truite arc-en-ciel.
récipients pour essai, les substances de faible solubi-
NOTE 5 Consulter des manuels d’élevage des poissons, lité aqueuse peuvent être solubilisées ou dispersées
par exemple [2] dans l’annexe B.
par des moyens adéquats tels que des dispositifs à
ultrasons ou par l’emploi de solvants organiques de
faible toxicité vis-à-vis du poisson. Lorsqu’un tel sol-
5 Réactifs
vant organique est utilisé, sa concentration dans la
solution d’essai ne doit pas dépasser 0,l ml/1 (elle
Utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique
doit, de préférence, se situer au-dessous de
reconnue. L’eau utilisée pour la préparation des solu-
0,Ol ml/l), et deux jeux d’essais témoins, l’un conte-
tions mères doit être distillée dans un appareil en
nant le solvant à la concentration maximale utilisée
verre ou déionisée et de pureté au moins équivalente.
dans les récipients d’essai et l’autre, sans solvant ni
substance à expérimenter, doivent être inclus.
5.1 Eau de dilution
NOTE 8 II est préférable d’utiliser la même concentration
L’eau de dilution doit être adaptée à la survie à long
de solvant dans tous les récipients pour essai.
terme et à la croissance des poissons d’essai. Le pH
de l’eau de dilution doit se situer dans un domaine
5.3 Solutions d‘essai
compris entre 6,7 et 8,5, mais pour un test donné, le
pH de l’eau de dilution ne devra pas varier de plus de
Préparer les solutions d’essai par ajout de quantités
+ 0,2 unité pH vis-à-vis de la valeur moyenne.
-
appropriées de la solution mère de la substance à
expérimenter (5.2) à l’eau de dilution pour obtenir les
NOTE 6 Un tel intervalle de pH peut être normalement
concentrations nécessaires (8.2). II est recommandé,
associé a une alcalinité de bicarbonate de 1 mg/1 à
lorsqu’une solution mère est préparée dans de l’eau
100 mg/1 de CaCO, et à des valeurs de dureté totales de
déionisée ou distillée, de ne pas ajouter plus de
20 mg/1 à 300 mg/1 de CaCO,; toutefois, ces intervalles dé-
100 ml de la solution mère pour 10 litres d’eau de di-
pendront de la constitution exacte de l’eau de dilution et du
lution. Lorsque cela est possible, il est très important
temps disponible pour l’équilibrage de l’eau. Une eau artifi-
cielle appropriée peut être réalisée au moyen d’eau distillée,
de déterminer les concentrations de la substance à
comme suit:
expérimenter dans chaque récipient d’essai, sauf pour
les eaux résiduaires où cela peut ne pas être possible.
294,0 mg/1 CaCl,,2H,O
6 Appareillage
123,3 mg/1 MgS0,,7H20
63,0 mg/1 NaHCO,
6.1 Généralités
5,5 mg/1 KCI
Tout matériau qui est susceptible d’entrer en contact
avec tout liquide dans lequel les poissons sont placés
ou avec lequel ils sont mis en contact, doit être inerte
et ne doit pas absorber significativement la substance
5.2 Solutions mères des substances à
à expérimenter.
expérimenter
Le matériel courant de laboratoire [y compris un filet
Préparer une solution mère de la substance à expéri- en nylon ou en tout autre matériau chimiquement
menter par dissolution d’une quantité connue de la inerte, pour les récipients témoins et un autre pour
substance d’essai dans un volume défini d’eau de di- tous les récipients pour essai (6.2)] doit être utilisé.
3

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0 ISO
ISO 10229:1994(F)
Pour le marquage à froid, les fers de marquage doi-
6.2 Récipients pour essai, d’une capacité de 45 li-
vent être constitués par du fil d’acier inoxydable (par
tres au moins. Leurs parois latérales doivent être re-
exemple 22 SWG 316) pliés pour former un chiffre
couvertes d’un matériau opaque, de manière à
arabe ou une lettre et fixés à un manche non métalli-
minimiser les perturbations pour les poissons.
que. La figure 1 illustre un exemple de modèle appro-
Avant emploi, les récipients pour essai neufs doivent
prié pour ces marques. Les marques doivent être
être soigneusement lavés puis rincés successivement
refroidies dans de l’azote liquide contenu dans un
avec de l’eau et de l’eau de dilution (5.1). En fin d’es-
flacon dûment isolé.
sai, les récipients doivent être vidés, nettoyés, par
exemple au moyen d’un détergent non ionique (suivi
NOTES
par des lavages à l’acide et aux solvants pour les
substances susceptibles de s’absorber sur les réci-
9 Directement après le marquage, la marque est presque
pients), rincés à l’eau pour éliminer toute trace de la
invisible, mais elle apparaît progressivement pendant les
substance d’essai et de l’agent de nettoyage, et sé- 2 jours qui suivent pour être ensuite clairement visible pen-
chés. dant 6 semaines au moins. Les marques qui comportent
des boucles fermées (comme dans les chiffres 0, 6, 8, 9)
Les récipients pour essai doivent être rincés avec de seront évitées dans le cas où elles favorisent une infection
de la peau. La face de la marque sera lisse et plate, de
l’eau de dilution (5.1) juste avant l’emploi.
manière à éviter une pression excessive en tout point de la
peau marquée.
6.3 Contrôle de la température, pour maintenir la
température des solutions d’essai et d
...

NORME
INTERNATIONALE
Première édition
1994-I Z-01
Qualité de l’eau - Détermination de la
toxicité à long terme de substances
vis-à-vis d’un poisson d’eau douce -
Méthode d’évaluation des effets de
substances sur le taux de croissance de la
truite arc-en-ciel [ Oncorhynchus mykiss
Walbaum (Teleostei, Salmonidae)]
Wa ter quality - Determination of the prolonged toxicity of substances to
freshwater fish - Method for evaluating the effects of substances on the
growth rate of rainbow trout [Oncorhynchus mykiss Walbaum (Teleostei,
Salmonidaerj
Numéro de référence
ISO 10229: 1994(F)

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ISO 10229:1994(F)
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération
mondiale d’organismes nationaux de normalisation (comités membres de
I’ISO). L’élaboration des Normes internationales est en général confiée aux
comités techniques de I’ISO. Chaque comité membre intéressé par une
étude a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les
organisations internationales, gouvernementales et non gouvernemen-
tales, en liaison avec I’ISO participent également aux travaux. L’ISO colla-
bore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (CEI)
en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques
sont soumis aux comités membres pour vote. Leur publication comme
Normes internationales requiert l’approbation de 75 % au moins des co-
mités membres votants.
La Norme internationale ISO 10229 a été élaborée par le comité technique
ISO/K 147, Qualité de /‘eau, sous-comité SC 5, Méthodes biologiques.
Les annexes A et B de la présente Norme internationale sont données
uniquement à titre d’information.
0 ISO 1994
Droits de reproduction réservés. Sauf prescription différente, aucune partie de cette publi-
cation ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun pro-
cédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans l’accord
écrit de l’éditeur.
Organisation internationale de normalisation
56 l CH-121
Case Postale 1 Genève 20 l Su isse
Version française tirée en 1995
Imprimé en Suisse

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0 ISO
ISO 10229:1994(F)
Introduction
La présente Norme internationale décrit des procédures d’essai pour dé-
terminer la toxicité à long terme de substances vis-à-vis d’un poisson
d’eau douce. Ces méthodes comprennent la détermination des réponses
létales et sublétales. Dans tous les cas, l’utilisation spécifiée d’une espèce
n’exclut pas l’utilisation d’autres espèces. Les méthodes présentées ici
peuvent être aussi utilisées pour d’autres espèces de poissons d’eau
douce, à condition d’apporter des modifications appropriées, par exemple
à la qualité de l’eau de dilution, aux conditions de température et aux taux
d’alimentation et de définir les relations entre les taux de croissance, les
taux d’alimentation et les efficacités de conversion.
Dans le cadre de la présente Norme internationale, un choix peut être
opéré entre les méthodes statique, semi-statique et avec renouvellement
continu. Ces méthodes ont déjà été décrites pour la détermination de la
toxicité aiguë létale de substances vis-à-vis d’un poisson d’eau douce dans
I’ISO 7346-2 et I’ISO 7346-3, respectivement. Le choix de la méthode de
présentation de la solution d’essai dépend de deux facteurs: la nature de
la substance d’essai et la forme de la méthode d’essai.
La méthode avec renouvellement continu peut être utilisée pour la plupart
des types de substances, y compris celles qui sont instables dans l’eau,
mais les concentrations de la substance à expérimenter sont déterminées
chaque fois que possible. La méthode semi-statique peut être utilisée pour
étudier les substances dont la concentration peut être maintenue de façon
satisfaisante tout au long de l’essai par le renouvellement des solutions
toutes les 24 h.
Pour faciliter la préparation et le maintien de concentrations de substances
qui peuvent invoquer les réponses choisies chez le poisson à des
concentrations proches de celle de leur solubilité aqueuse, un faible vo-
lume de solvant est parfois utilisé, comme indiqué dans les méthodes.

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Page blanche

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ISO 10229:1994(F)
NORME INTERNATIONALE 0 KO
Qualité de l’eau - Détermination de la toxicité à long
terme de substances vis-à-vis d’un poisson d’eau
Méthode d’évaluation des effets de
douce -
substances sur le taux de croissance de la truite
arc-en-ciel [ Oncorhynchus mykiss Walbaum (Teleostei,
Salmonidae)]
Les résultats sont insuffisants par eux-mêmes pour
1 Domaine d’application
définir les limites de qualité de l’eau pour la protection
de l’environnement.
La présente Norme internationale prescrit une mé-
thode pour la détermination de la toxicité sublétale à
La méthode peut être adaptée à d’autres poissons
long terme de substances solubles dans l’eau dans
d’eau douce, marine et saumâtre avec une modifica-
des conditions spécifiées vis-à-vis d’une espèce de
tion appropriée des conditions d’essai, notamment en
poisson anadrome [Oncorhynchus mykiss Walbaum
ce qui concerne la température, la quantité et la qua-
, Salmonidae) - nom commun, truite
(Teleostei
lité de l’eau de dilution, la nourriture et la technique
arc-en-ciel] dans l’eau douce.
de marquage des poissons.
NOTE 1 (Sub,stances) est considéré comme incluant les
produits chimiques purs testés seuls ou en mélange, les
eaux résiduaires, les eaux industrielles ou d’autres eaux
2 Références normatives
dont il est nécessaire de déterminer la toxicité sublétale
vis-à-vis du poisson. II convient d’examiner les eaux
Les normes suivantes contiennent des dispositions
résiduaires et les eaux industrielles dans une gamme de
qui, par suite de la référence qui en est faite, consti-
dilutions (voir 8.2).
tuent des dispositions valables pour la présente
Norme internationale. Au moment de la publication,
La réponse mesurée est la modification du taux de
les éditions indiquées étaient en vigueur. Toute
croissance du poisson exposé à la substance d’essai
norme est sujette à révision et les parties prenantes
pendant des périodes de 14 jours et 28 jours (voir
des accords fondés sur la présente Norme internatio-
[l] en annexe B).
nale sont invitées à rechercher la possibilité d’appli-
quer les éditions les plus récentes des normes
NOTE 2 La masse de chaque poisson au départ de I’es-
indiquées ci-après. Les membres de la CEI et de I’ISO
sai, la période d’exposition, le programme d’alimentation et
le domaine de température ont été sélectionnés de manière possèdent le registre des Normes internationales en
.
à garantir que le poisson témoin croîtra de manière
vigueur à un moment donné.
exponentielle tout au long de l’essai.
ISO 7346-2:1984, Qualité de l’eau - Détermination
La méthode est applicable pour l’évaluation, pour de la toxicité aiguë létale de substances vis-à-vis
chaque substance d’essai, d’une catégorie de toxicité d’un poisson d’eau douce (Brachydanio rerio
sublétale à long terme vis-à-vis d’Oncorhynchus Hamilton-Buchanan (Teleostei
Cyprinidae)) -
mykiss dans les conditions d’essai. Partie 2: Méthode semi-s ta tique:

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ISO 10229:1994(F)
la durée de l’essai, ou si l’on sait que les concen-
ISO 7346-3:1984, Qualité de l’eau - Détermination
trations de la substance d’essai ont connu une mo-
de la toxicité aiguë létale de substances vis-à-vis
dification significative (c’est-à-dire supérieure à 20 %
d’un poisson d’eau douce (Brachydanio rerio
(Teleos tei Cyprinidae)) - de la moyenne) à un stade quelconque pendant I’es-
Hamilton-Buchanan
sai, dans ce cas, et sans tenir compte de données
Partie 3: Méthode avec renouvellement continu.
analytiques chimiques disponibles ou non, la LOEC
et la NOEC ne peuvent être déterminées en utilisant
la présente méthode d’essai. Dans ces cas, l’essai
3 Principe
n’est pas nécessairement invalidé, mais on peut seu-
lement affirmer que la LOEC de la substance est
Détermination, dans des conditions définies, des
< x mg/1 et que la NOEC de la substance est
concentrations auxquelles une substance réduit, de
< y mg/l, les valeurs x et y données étant estimées à
manière statistiquement significative, le taux de
partir des concentrations nominales utilisées.
croissance d’une population d’essai d’ Oncorhynchus
NOTE 3 Chaque fois que cela est possible, il est très
mykiss après des périodes d’exposition de 14 jours
important de déterminer les concentrations de la substance
et 28 jours à cette substance dans l’eau ambiante.
d’essai à laquelle les poissons sont exposés.
L’essai est réalisé en deux étapes:
Les poissons peuvent être identifiés individuellement
a) un essai préliminaire, réalisé en utilisant la truite tout au long de l’essai en utilisant la technique du
arc-en-ciel comme espèce d’essai, mais en accord marquage à froid ou une méthode équivalente (par
avec I’ISO 7346-2 ou I’ISO 7346-3 (bien que la exemple, le marquage aux radio-éléments), mais ceci
n’est pas obligatoire.
truite arc-en-ciel ne soit pas spécifiquement nom-
mée dans ces parties de I’ISO 7346) qui déter-
mine les concentrations auxquelles la substance
est létale pour 50 % d’une population d’essai
4 Organisme pour essai
après exposition à la substance dans l’eau am-
biante pendant 96 h: cette concentration létale
L’espèce recommandée pour l’essai est Onco-
moyenne est désignée par CL50 96 h et sert à
rhynchus mykiss Walbaum (Teleostei, Salmonidae),
déterminer la gamme des concentrations pour
dont le nom commun est la truite arc-en-ciel. Les
l’essai définitif (voir note 11 en 8.1).
poissons pour essai doivent être sélectionnés à partir
d’une population d’un stock unique. Ce stock doit
utilisant 16 poissons par
b) un essai définitif,
avoir été acclimaté et, dans tous les cas, maintenu
concentration, dans lequel les résultats sont en-
pendant 2 semaines au moins avant l’essai, dans l’eau
registrés à la fois comme la concentration obser-
de dilution, aérée de manière continue par barbotage
vée la plus faible présentant un effet (LOEC) et la
d’air dans des conditions de qualité de l’eau, de pro-
concentration sans effets observés (NOEC). Elles
gramme d’alimentation et d’éclairement semblables
comportent une indication de la période d’expo-
à celles utilisées pour l’essai.
sition concernée, comme dans (( LOEC-28 jours).
Les données peuvent être ajustées à un modèle
Sauf indication contraire (voir article 8) les poissons
de régression, afin de calculer la CII 0 (concen-
doivent être nourris selon une quantité minimale
tration d’inhibition pour un effet à 10 %) ou des
égale à 1 % de leur masse corporelle humide par jour
statistiques similaires.
pendant la période de préacclimatation et d’acclima-
tation et à 4 % par jour pendant l’essai définitif (voir
Si les données analytiques indiquent que les concen-
. .
8 2
trations d’essai moyennes restent relativement
constantes (c’est-à-dire à moins de 20 % des valeurs
NOTE 4 Cette latitude en ce qui concerne la quantité ad-
nominales) tout au long de l’essai, la méthode permet
ministrée pendant la période de pré-essai permet au pois-
alors l’utilisation de concentrations, soit mesurées,
son d’arriver, ou d’être maintenu, à une taille appropriée
soit nominales dans les déclarations sur LOEC et
(voir ci-après) pour le début de l’essai.
NOEC. Si ces analyses indiquent que les concen-
La nourriture doit être constituée par un frai de
trations présentes restent relativement constantes
(c’est-à-dire & 20 % de la moyenne) mais sont infé- salmonidae sec et divisée en deux portions égales
rieures à 80 % ou supérieures à 120 % des valeurs administrées aux poissons à raison de deux rations
nominales, les valeurs analytiques tirées de cette journalières, à 5 h minimum d’intervalle. Après
méthode sont utilisées en présentant la LOEC et la 14 jours d’exposition à la substance d’essai, lorsque
NOEC. S’il n’est pas manifeste que les concentrations les poissons seront repesés, les rations seront calcu-
d’essai restent à un niveau acceptable pendant toute lées à nouveau pour chaque récipient pour essai.

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0 ISO ISO 10229:1994(F)
Au début de l’essai, chaque poisson devra avoir une lution, d’eau déionisée ou d’eau distillée dans un ap-
masse supérieure à 3 g et inférieure à 5 g (mais voir pareil en verre.
également 8.2). Pour l’ensemble du lot de poissons
NOTE 7 Dans le cas où la substance à expérimenter est
utilisés lors de l’essai, la gamme des masses indivi-
une eau usée, une eau industrielle ou une autre eau (voir
duelles au début de l’essai se situera à + 10 % de la
article 1, note 1) et n’est pas constituée par un ou plusieurs
masse arithmétique moyenne.
produits chimiques purs, ces eaux peuvent être considérées
comme la solution mère.
Les poissons d’essai doivent être exempts de mala-
dies ou de malformations visibles. Ils ne doivent subir
Préparer ou obtenir la solution mère aussi fréquem-
aucun traitement pendant l’essai ou pendant les
ment que nécessaire de façon à conserver des solu-
2 semaines qui précèdent l’essai.
tions stables. Bien que l’utilisation de solvants ne soit
pas souhaitable, afin de permettre la préparation des
dans des conditions d’envi-
Maintenir les poissons
solutions mères et de faciliter leur transfert dans les
ronnement appropriées à la truite arc-en-ciel.
récipients pour essai, les substances de faible solubi-
NOTE 5 Consulter des manuels d’élevage des poissons, lité aqueuse peuvent être solubilisées ou dispersées
par exemple [2] dans l’annexe B.
par des moyens adéquats tels que des dispositifs à
ultrasons ou par l’emploi de solvants organiques de
faible toxicité vis-à-vis du poisson. Lorsqu’un tel sol-
5 Réactifs
vant organique est utilisé, sa concentration dans la
solution d’essai ne doit pas dépasser 0,l ml/1 (elle
Utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique
doit, de préférence, se situer au-dessous de
reconnue. L’eau utilisée pour la préparation des solu-
0,Ol ml/l), et deux jeux d’essais témoins, l’un conte-
tions mères doit être distillée dans un appareil en
nant le solvant à la concentration maximale utilisée
verre ou déionisée et de pureté au moins équivalente.
dans les récipients d’essai et l’autre, sans solvant ni
substance à expérimenter, doivent être inclus.
5.1 Eau de dilution
NOTE 8 II est préférable d’utiliser la même concentration
L’eau de dilution doit être adaptée à la survie à long
de solvant dans tous les récipients pour essai.
terme et à la croissance des poissons d’essai. Le pH
de l’eau de dilution doit se situer dans un domaine
5.3 Solutions d‘essai
compris entre 6,7 et 8,5, mais pour un test donné, le
pH de l’eau de dilution ne devra pas varier de plus de
Préparer les solutions d’essai par ajout de quantités
+ 0,2 unité pH vis-à-vis de la valeur moyenne.
-
appropriées de la solution mère de la substance à
expérimenter (5.2) à l’eau de dilution pour obtenir les
NOTE 6 Un tel intervalle de pH peut être normalement
concentrations nécessaires (8.2). II est recommandé,
associé a une alcalinité de bicarbonate de 1 mg/1 à
lorsqu’une solution mère est préparée dans de l’eau
100 mg/1 de CaCO, et à des valeurs de dureté totales de
déionisée ou distillée, de ne pas ajouter plus de
20 mg/1 à 300 mg/1 de CaCO,; toutefois, ces intervalles dé-
100 ml de la solution mère pour 10 litres d’eau de di-
pendront de la constitution exacte de l’eau de dilution et du
lution. Lorsque cela est possible, il est très important
temps disponible pour l’équilibrage de l’eau. Une eau artifi-
cielle appropriée peut être réalisée au moyen d’eau distillée,
de déterminer les concentrations de la substance à
comme suit:
expérimenter dans chaque récipient d’essai, sauf pour
les eaux résiduaires où cela peut ne pas être possible.
294,0 mg/1 CaCl,,2H,O
6 Appareillage
123,3 mg/1 MgS0,,7H20
63,0 mg/1 NaHCO,
6.1 Généralités
5,5 mg/1 KCI
Tout matériau qui est susceptible d’entrer en contact
avec tout liquide dans lequel les poissons sont placés
ou avec lequel ils sont mis en contact, doit être inerte
et ne doit pas absorber significativement la substance
5.2 Solutions mères des substances à
à expérimenter.
expérimenter
Le matériel courant de laboratoire [y compris un filet
Préparer une solution mère de la substance à expéri- en nylon ou en tout autre matériau chimiquement
menter par dissolution d’une quantité connue de la inerte, pour les récipients témoins et un autre pour
substance d’essai dans un volume défini d’eau de di- tous les récipients pour essai (6.2)] doit être utilisé.
3

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0 ISO
ISO 10229:1994(F)
Pour le marquage à froid, les fers de marquage doi-
6.2 Récipients pour essai, d’une capacité de 45 li-
vent être constitués par du fil d’acier inoxydable (par
tres au moins. Leurs parois latérales doivent être re-
exemple 22 SWG 316) pliés pour former un chiffre
couvertes d’un matériau opaque, de manière à
arabe ou une lettre et fixés à un manche non métalli-
minimiser les perturbations pour les poissons.
que. La figure 1 illustre un exemple de modèle appro-
Avant emploi, les récipients pour essai neufs doivent
prié pour ces marques. Les marques doivent être
être soigneusement lavés puis rincés successivement
refroidies dans de l’azote liquide contenu dans un
avec de l’eau et de l’eau de dilution (5.1). En fin d’es-
flacon dûment isolé.
sai, les récipients doivent être vidés, nettoyés, par
exemple au moyen d’un détergent non ionique (suivi
NOTES
par des lavages à l’acide et aux solvants pour les
substances susceptibles de s’absorber sur les réci-
9 Directement après le marquage, la marque est presque
pients), rincés à l’eau pour éliminer toute trace de la
invisible, mais elle apparaît progressivement pendant les
substance d’essai et de l’agent de nettoyage, et sé- 2 jours qui suivent pour être ensuite clairement visible pen-
chés. dant 6 semaines au moins. Les marques qui comportent
des boucles fermées (comme dans les chiffres 0, 6, 8, 9)
Les récipients pour essai doivent être rincés avec de seront évitées dans le cas où elles favorisent une infection
de la peau. La face de la marque sera lisse et plate, de
l’eau de dilution (5.1) juste avant l’emploi.
manière à éviter une pression excessive en tout point de la
peau marquée.
6.3 Contrôle de la température, pour maintenir la
température des solutions d’essai et d
...